方法原理：

将一定量的乳糖、指示剂（溴甲酚紫和2，3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC）以及营养成分等吸附于一定面积的无菌滤纸上，当细菌生长繁殖时，产酸使PH值降低，溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色。同时，产气过程相应的脱氢酶在适宜的PH范围内，催化底物脱氢还原TTC形成红色的不溶性三苯甲臜（TTF），即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点（或红晕）。通过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断，从而确定是否有（粪）大肠菌群存在，再通过查MPN表就可得出相应（粪）大肠菌群的浓度值。

适用范围：

本产品适用于地表水、生活污水、医疗机构及禽畜养殖业等其他行业排放的废水中（粪）大肠菌群的快速测定。

规格说明：1份/水样/包（15张纸片）

 

型号	规格/接种总量	适用范围
LCHJ755（A）	1份/水样/包（接种总量:55.5ml）其中5份10ml水样，5份1ml水样，5份0.1ml水样	适用于地表水（湖水、水源水）中大肠菌群的快速检测；
LCHJ755（B）	1份/水样/包（接种总量:5.55ml）其中5份1ml水样，5份0.1ml水样，5份0.01ml水样	适用于河水、生活用水、医疗机构处理后排污水、禽畜养殖业等排放废水中大肠菌群的快速检测。

使用说明：

 

1、样本前处理：

用灭菌器具，按照《HJ755-2015 水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法》的规定及无菌操作的要求，采集水样400ml放入已灭菌的采样瓶中。如果是经加氯处理的废水，需在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠（EDTA- Na2）溶液（5.4）1.2ml，以消除干扰。酸性样品，需调节胖胖的PH值至7.0-8.0。

采样后2h内检测，否则，需10℃以下冷藏并6h内送检，实验室接样后，应将样品放入0-4℃冰箱并2h内测定。

注2:10mg硫代硫酸钠可保证去除水样中1.5mg余氯，硫代硫酸钠用量克根据水样实际余氯量调整。

2、分析步骤

2.1接种量

每个样品按三个不同的接种量接种，每个接种量分别接种5张纸片，共接种15张纸片。

根据水样的污染程度确定接种量，应尽可能使5个接种量最大的纸片为阳性、5个接种量最小的纸片为阴性。

 清洁水样的参考接种量分别为10 ml、1 ml、0.1 ml，受污染水样参考接种量根据污染程度可接种1 ml、0.1ml、0.01 ml或0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml等。

 接种量小于1ml时，水样应制成稀释样品后使用。接种量为0.1ml、0.01 ml时，分别制成1:10稀释样品、1:100稀释样品。其它接种量的稀释样品依次类推。

1:10稀释样品的制作方法为：吸取1ml水样，注入盛有9 ml无菌水的试管中，混匀，制成1:10稀释样品。其它稀释度的稀释样品同法制作。

 2.2接种、培养

水样充分混匀，按无菌操作制作稀释水样及接种水样。

清洁水样，接种水样总量为55.5ml，10 ml水样量纸片5张，每张接种水样10ml，1 ml水样量纸片10张，其中5张各接种水样1ml，另5张各接种1:10的稀释水样1ml。受污染水样，接种3个不同稀释度的1ml稀释水样各5张。

接种水样应均匀涂布于纸片上，纸片充分侵润、吸收水样，用手轻轻压平，做好标记。

 测总大肠菌群时，在37±1℃的条件下培养18-24h后观察结果；测粪大肠菌群时，在44.5±0.5℃的条件下培养18-24h后观察结果。

 2.3 粪大肠菌群检验

1、检测粪大肠菌群时，纸片接种后应立即放置于44.5±0.5℃的恒温培养箱中培养，在常温下放置过久将影响检测结果的准确性。

2、纸片加入水样后，短时间内变黄或退色，表明水样存在酸性物质活氧化剂干扰，需按“7样品”一节方法去除相应干扰。

 结果判定

（1）纸片上出现红斑或红晕且周围变黄，为阳性。

（2）纸片全片变黄，无红斑或红晕，为阳性。

（3）纸片部分变黄，无红斑或红晕，为阴性。

（4）纸片的紫色背景上出现红斑或红晕，而周围不变黄，为阴性。

（5）纸片无变化，为阴性。

MPN表 详见《HJ755-2015 水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法》